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过氧化物酶活性的测定(比色法)

2021-12-05 04:38:50

来源:雷火app官网 作者:雷火亚洲电竞先驱

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  过氧化物酶遍及分散于植物的各个构造器官中。正在有过氧化氢存不才,过氧化物酶能使愈创木酚氧化,天生茶褐色物质,可用分光光度计丈量天生物的含量。

  响应同化液:100mmol/L磷酸缓冲液(pH6.0)50ml于烧杯中,到场愈创木酚28μl,于磁力搅拌器上加热搅拌,直至愈创木酚消融,待溶液冷却后,到场30%过氧化氢19μl,同化平均,保全于冰箱中。

  1.称取植物原料1g,加20mmol/L KH2 PO4 5ml,于研钵中研磨成匀浆,以4000r/min离心15分钟,倾出上清液保全正在冷处,残渣再用5mlKH2 PO4 溶液提取一次,统一两次上清液,贮于冷处备用。

  2.取光径1cm比色杯2只,于1只中到场响应同化液3ml,KH2 PO4 1ml,举动校零比照,另1只中到场响应同化液3ml,上述酶液1ml(如酶活性过高可稀释之),立地开启秒表记实期间,于分光光度计上丈量吸光度值,每隔1分钟读数一次,读数于波长470nm下举办。

  3.以每分钟吸光度变更值吐露酶活性巨细,即以△ A 470/min·mg卵白质(或鲜重g)吐露之。卵白质含量测定参阅实践56。

  迩来正在做transwell预实践,用的Millipore transwell幼室,8um孔径,仿单说无须铺胶,每孔10万个细胞,试了差异的培植期间,用结晶紫或DAPI染色后,创造膜上都没有细胞,惟有相同下图中的圆圈,看着也不是细胞,加了因子的实践组圆圈数目要比比照组多。初度做这个实践,不真切是什么由来,恳请老手帮我剖释一下。

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